碘测定法测定β-内酰胺酶的原理是，如果牛奶中含有β-内酰胺酶，β-内酰胺酶分解青霉素后产生的青霉噻唑酸与淀粉竞争游离碘，破坏了碘与淀粉的蓝色复合物，使蓝色变为无色，从而判断牛奶中是否掺有抗生素分解酶。结果判定：在2分钟内能使蓝色完全消退的为β-内酰胺酶阳性，不消退者为阴性。即蓝色为阴性，白色为阳性。