异烟肼抑制结核分枝杆菌特有的分枝菌酸的合成，对生长旺盛的结核分枝杆菌有抑菌、杀菌作用。它易于渗入细胞内，故对细胞内的结核菌也有很强的抗菌作用。结核菌对异烟肼易产生抗药性，但同时其致病力也降低，且停药一段时间后多可恢复对药物的敏感性。异烟肼与其他同类药物间无交叉耐药性(除外乙硫异烟胺)。